En 2000, Harold a joué le rôle de Brian Kinney, un personnage central de la populaire série dramatique gay de Showtime, Queer as Folk.
Pendant l’hiatus estival de Queer as Folk, Harold a fait ses débuts au théâtre à New York dans Uncle Bob aux côtés de George Morfogen.
En 2003, Harold a joué dans Wake, produit par Susan Landau Finch et réalisé par son mari Henry LeRoy Finch.
Harold avait le rôle principal de l’agent spécial Graham Kelton dans la série éphémère de FOX Vanished en 2006.
Harold a également joué le rôle de Wyatt Earp dans deux épisodes de la série Deadwood de HBO et est apparu deux fois dans la série The Unit de CBS. Aux côtés de David Bowie, Harold a été producteur associé du documentaire Scott Walker : 30 Century Man.
Gale Harold est revenu sur la scène new-yorkaise dans la pièce Suddenly Last Summer de Tennessee Williams le 15 novembre 2006, dans le rôle du Dr Cukrowicz (« Dr Sugar »). Les co-stars d’Harold dans la production de répertoire du Roundabout Theatre, un engagement limité Off-Broadway jusqu’au 20 janvier 2007, étaient Blythe Danner et Carla Gugino.
Harold était le rôle principal masculin dans la comédie romantique indépendante Falling for Grace, qui a fait des débuts favorables au Festival du film de Tribeca 2006 (sous le titre provisoire East Broadway). Harold jouait un célibataire new-yorkais éligible dans une relation interraciale avec une femme asiatique-américaine.
Harold est apparu en novembre 2007 dans un rôle d’invité dans la série Grey’s Anatomy d’ABC dans le rôle de Shane, un ambulancier et suprématiste blanc qui est blessé dans un accident d’ambulance.
Il est apparu dans Desperate Housewives lors du final de la quatrième saison le 18 mai 2008 dans le rôle de Jackson Braddock, l’intérêt amoureux de Susan Mayer. Six mois après un grave accident de moto, Harold est revenu jouer Jackson dans l’épisode du 3 mai 2009 de la série.
En janvier et février 2010, Harold a joué aux côtés de Denise Crosby et de l’ex-mannequin Claudia Mason dans Orpheus Descending de Tennessee Williams au Theater/Theatre de Los Angeles. La production et la distribution ont reçu des critiques majoritairement positives, le Los Angeles Times qualifiant sa performance de « brillante » et ajoutant « Harold, idéalement distribué, s’enflamme magnifiquement avec Crosby, dont l’interprétation non conventionnelle est une révélation touchante. »
En juillet 2010, il a été annoncé lors du Television Critics Association Summer Tour que Harold avait accepté un rôle récurrent de professeur de droit dans la prochaine série Hellcats. La série a conclu sa saison avec le personnage d’Harold impliqué dans une liaison avec le personnage principal de la série, Marti (joué par Aly Michalka). La série a été annulée après une saison.
La CW a choisi The Secret Circle pour l’automne 2011. La série tournait autour d’un coven de sorcières adolescentes dans une petite ville de Washington, chacune étant membre d’un clan de sorcières différent datant du 17ème siècle. Harold jouait un sorcier mâle intrigant et puissant qui est le père de l’un des adolescents. Le 11 mai 2012, The CW a annoncé l’annulation de la série.
En 2011, Harold a également joué dans deux films, Low Fidelity et Rehab, en tant qu’un des personnages principaux.
Harold est apparu dans trois épisodes de la première saison de l’émission Defiance (1.06, 1.08 et 1.09). Le 10 mai 2013, Syfy a renouvelé Defiance pour une deuxième saison de 13 épisodes qui sera diffusée en 2014. Harold est revenu pour une apparition dans la deuxième saison de la série dans l’épisode « Put the Damage On ».
En 2013, Harold est apparu dans un court-métrage, The Spirit Game. Le film a eu sa première mondiale au Festival de Cannes et il a été mis en ligne le 2 septembre 2014.
Lors de la convention Rise ‘n Shine (9 juin 2013), Harold a déclaré qu’il travaillait actuellement sur un projet sur la guerre civile, Field of Lost Shoes.
En 2014, Harold a participé à différents projets, dont le court-métrage Thirst, réalisé par Rachel McDonald et présenté en avant-première au Festival du film de Locarno en Suisse le 7 août 2014, et le film Echo Park, présenté en avant-première au LA Film Festival le 14 juin 2014. Il a également joué dans le film de science-fiction/action Andron.