Initiering
Eukaryotiskt DNA är bundet till proteiner som kallas histoner för att bilda strukturer som kallas nukleosomer. Under initieringen görs DNA:t tillgängligt för de proteiner och enzymer som är involverade i replikationsprocessen. Det finns specifika kromosomala platser som kallas replikationsursprung där replikationen börjar. Hos vissa eukaryoter, som jäst, definieras dessa platser genom att de har en specifik sekvens av baspar som replikationsinitieringsproteinerna binder till. Hos andra eukaryoter, t.ex. människor, verkar det inte finnas någon konsensussekvens för replikationens ursprung. I stället kan replikationsinitieringsproteinerna identifiera och binda till specifika modifieringar av nukleosomerna i ursprungsregionen.
Vissa proteiner känner igen och binder till replikationsursprunget och tillåter sedan de andra proteiner som är nödvändiga för DNA-replikation att binda till samma region. De första proteinerna som binder till DNA sägs ”rekrytera” de andra proteinerna. Två kopior av ett enzym som kallas helicas hör till de proteiner som rekryteras till ursprunget. Varje helicas avvecklar och separerar DNA-helixen till enkelsträngat DNA. När DNA:t öppnas upp bildas Y-formade strukturer som kallas replikationsgafflar. Eftersom två helikaser binder sig bildas två replikationsgafflar vid replikationsursprunget. Dessa förlängs i båda riktningarna när replikationen fortskrider och skapar en replikationsbubbla. Det finns flera replikationsursprung på den eukaryota kromosomen, vilket gör att replikation kan ske samtidigt på hundratals till tusentals platser längs varje kromosom.